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    枸杞多糖的提取、純化、結構鑒定及藥理作用研究進展
    發布時間:2022-05-07 分享到:
    枸杞是中醫中常用的滋補藥材,枸杞多糖是枸杞中*主要的活性成分,也是其發揮藥效的主要成分,具有多種生物活性,因此開發枸杞多糖具有良好的市場前景。文章綜述了近年來關于枸杞多糖的提取、純化、結構鑒定、藥理作用及生產中的應用等相關研究,可為枸杞多糖的深入研究和相關產品的開發提供理論依據和借鑒。

    [1]西北民族大學生命科學與工程學院,甘肅 蘭州 730030

    摘要:枸杞是中醫中常用的滋補藥材,枸杞多糖是枸杞中*主要的活性成分,也是其發揮藥效的主要成分,具有多種生物活性,因此開發枸杞多糖具有良好的市場前景。文章綜述了近年來關于枸杞多糖的提取、純化、結構鑒定、藥理作用及生產中的應用等相關研究,可為枸杞多糖的深入研究和相關產品的開發提供理論依據和借鑒。

    關鍵詞枸杞;枸杞多糖;制備;藥理作用

    中圖分類號:R285

    Research Progress on Extraction, Purification, Structure Identification and Pharmacological Action of Lycium barbarum Polysaccharides

     

    WANG Ming-jin, LONG Ling*

    (Life Science and Engineering College of Northwest Minzu University, Lanzhou Gansu 730030, China)

     

    AbstractLycium barbarum L. is a common tonic medicine in traditional Chinese medicine and Lycium barbarum polysaccharides (LBP) is the most important active component and material basis for effectiveness, It has a variety of biological activities. Therefore, the development of the LBP industry has a good market. In this paper, the extraction, purification, structural identification, pharmacological effects and application in production of LBP were reviewed. It can provide a theoretical basis and reference for the in-depth study of LBP and the development of related products.

    Key words: Lycium barbarum L; Lycium barbarum polysaccharide; preparation; pharmacological action

    枸杞是茄科枸杞屬枸杞( Lycium barbarum L.)的果實,是我國中醫中常用的滋補類藥材,也是我國重要的藥食同源植物和經濟作物,廣泛分布于我國西北寧夏、青海、甘肅、新疆等地區?,F代植物化學及營養學實驗證明,枸杞中含有花色苷類[1]、多酚類[2]、黃酮類[3]、多糖[4]、生物堿[5]、脂肪酸[6]、類胡蘿卜素[7]及各種微量元素[8]等活性成分,還含有氨基酸、維生素等營養物質。其中枸杞多糖Lycium barbarum Polysaccharides,LBP含量*為豐富,是枸杞中主要的功能成分之一。研究表明LBP具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、抗疲勞、防輻射、護肝、免疫調節等作用。文章就LBP的提取、純化、結構鑒定、藥理作用及實際應用等進行綜述,旨在為枸杞及LBP的深入開發利用提供借鑒和科學依據。

    1.枸杞多糖的制備

    1.1 LBP的提取

    目前關于LBP的提取方法主要有水浸提法[9-11]、超聲輔助提取法[12-13]、微波輔助提取法[14-15]、酶法提取[16-17]等。近些年來,也有高速剪切技術[18]、*壓輔助復合酶法[19]等新方法用以提取LBP。

    水浸提法操作簡單、成本低、受干擾小,但耗時長、提取純度和效率較低。超聲輔助法提取效率高、條件要求及能耗低。微波法是通過高頻電磁波使細胞破裂,便于胞內的有效成分快速溶出而達到提取目的,具有快速、低能耗、污染小的特點。酶法提取LBP反應條件溫和,但提取成本較高,不宜于廣泛推廣。YANG[11]采用亞臨界水提法提取LBP,110℃、5 MPa下提取80 min后發現LBP的提取率由水浸提法的7.63%提高到10.67%。在采用超聲波強化亞臨界水提法后,提取率更是提高近一倍。杜津昊等[18]采用高速剪切法使LBP提取率達到27.86 %。

    1 LBP不同提取方法的工藝參數及得率

    Tab.1 LBP process parameters and yield of different extraction methods

    序號

    提取方法

    優化方法

    工藝參數

    多糖提取率(%

    參考文獻

    1

    熱水浸提法

    單因素和正交實驗

    料液比1:25、溫度60、水浴時間2 h、pH 8

    9.96

    [9]

    2

    熱水浸提法

    響應面

    提取時間3.9 h、料液比1:36.6、溫度93.2

    4.28

    [10]

    3

    水提法

    超聲波強化

    溫度110、壓強5 MPa、提取時間80 min

    14.12

    [11]

    4

    超聲浸提

    單因素實驗和響應面

    提取時間80 min、超聲功率185 W、料液比1:38、溫度73

    12.54

    [12]

    5

    超聲波法

    單因素和正交實驗

    料液比1:20、提取時間20 min、溫度65

    27.19

    [13]

    6

     

    微波法

     

    單因素和正交實驗

    料液比1:20、溫度85、微波時間45 min、微波功率200 W

    7.22

    [14]

    7

    微波法

    響應面

    料液比1:10、微波時間5 min、微波功率320 W

    10.14

    [15]

    8

    淀粉酶提取

    單因素和正交實驗

    pH 5、提取時間80 min、加酶量0.5%

    12.1

    [16]

    響應面

    酶解溫度49.56、酶解時間140 min、加酶量0.3%

    13.25

    9

    木瓜蛋白酶提取

    均勻設計

    加酶量0.2%、pH 4.2、溫度40、酶解時間1 h

    8.5

    [17]

    10

    高速剪切

    單因素和正交實驗

    溫度60、剪切時間2 min、剪切速率12000 r/min、料液比1:12、提取時間2 h

    27.86

    [18]

    11

    *壓輔助復合酶提取

    單因素實驗和遺傳算法

    壓力200 MPa、溫度25、保壓時間5.6 min、復合酶質量分數1.3%

    6.58

    [19]

     

    1.2枸杞多糖的純化

    經過初步提取后得到枸杞粗多糖,其中含有單糖、多糖、色素、蛋白質等多種雜質。為了得到組分均一、性質穩定的多糖,就要對其進行進一步純化。在純化之前,先要對LBP進行脫色和去蛋白處理。賈文聰等[20]采用正交實驗,證明在加入1.0 %過氧化氫、處理時間2.0 h、處理溫度45 ℃,LBP脫色率達到62.34 %。LONG[21]采用單因素和Sevag法對枸杞渣多糖脫蛋白工藝進行了優化,結果表明枸杞殘渣中*多糖產率為0.49 %,*小殘留蛋白質含量為0.087 %。凝膠滲透色譜分析表明,去蛋白的LBP分子變得更加均勻。X射線衍射表明脫蛋白枸杞多糖的氫鍵作用減弱。

    在對LBP進行脫色和脫蛋白處理后,經純化處理得到純度更高的多糖。文沛瑤等[22]采用叔丁醇-(NH4)2SO4-水提液三相萃取法純化LBP,發現三相萃取在純化LBP的同時還可以在一定程度上分離枸杞中蛋白質和黃酮。魏達鳳等[23]采用大孔吸附樹脂純化LBP,多糖保留率為87.47 %,大孔吸附樹脂還可多次使用。王博等[24]采用高速離心和膜技術結合來純化LBP,采用膜技術純化LBP操作簡便、耗能低、效果好、適合廣泛推廣。

    1.3枸杞多糖的結構鑒定

    LBP的生物活性與其結構密切相關,解析LBP結構才能正確分析其構效關系。而LBP的結構則與其平均分子量、單糖組成及摩爾比等有關。傳統的解析多糖結構方法有氣相色譜GC、*液相色譜HPLC、核磁共振NMR、紅外光譜IR、*凝膠排阻層析HPSEC及氣相色譜-質譜聯用儀GC-MS[25]等。近年來,有熒光基團標記的糖電泳技術、*陰離子交換色譜-脈沖安培檢測HPAEC-PAD技術[26]、PMP柱前衍生*液相色譜PMP-HPLC技術[26]等新方法也用于LBP的結構分析。

    2 LBP單糖組分及結構

    Tab.2 LBP monosaccharide composition and structure

    序號

    平均分子量(kDa

    方法

    單糖組成

    摩爾比

    參考文獻

    1

    4.92

    PMP柱前衍生*液相色譜法

    甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、D-半乳糖胺、D-木糖

    5.525.11

    28.06

    11.70

    [27]

    2

    56.2

    氣相色譜法

    鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖

    0.6510.71

    0.330.67

    110.41

    [28]

    3

    17.8

    核磁共振

    鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露 糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸

    3.6834.88

    2.461.03

    6.8937.64

    0.7312.6

    [29]

    2.枸杞多糖的生物活性

    2.1抗氧化與抗衰老

    有多項實驗證明,LBP具有良好的抗衰老、抗氧化活性。唐瑞[30]發現枸杞粗多糖可以提高果蠅的壽命,增加果蠅的攝食量和果蠅體內總超氧化物歧化酶T-SOD、銅鋅超氧化物歧化酶CuZn-SOD和過氧化氫酶CAT的活力,還可降低丙二醛MDA含量和急性氧化損傷誘發的致死率。YI[31]證明LBP能提高血液中超氧化物歧化酶SOD、CAT和谷胱甘肽過氧化物酶GSH-px的水平,降低MDA的水平,還可以提高皮膚SOD活性,降低皮膚MDA含量,增加羥脯氨酸Hyp含量,表明LBP具有延緩衰老的潛力。張春麗等[32]發現LBPDPPH自由基具有良好的清除作用,說明LBP具有良好的抗氧化活性。

    2.2抗腫瘤活性

    孫云龍等[33]發現LBP可以抑制人肝癌細胞HepG2、胃癌細胞SGC-7901及白血病細胞K562的增殖,表明LBP可以通過抑制腫瘤細胞生長來發揮抗腫瘤作用。DENG[34]通過體外實驗證明LBP對小鼠肝癌H22細胞具有良好的抑制作用,其中枸杞多糖組分-3LBP-3可以誘導H22細胞凋亡、線粒體膜電位破壞和在S期阻滯其生長;體內實驗還證明,LBP-3可降低H22荷瘤小鼠的腫瘤重量。ZENG[35]發現LBP可以提高移植裸鼠的存活率,減少腫瘤的體積和重量,還可通過抑制自噬來誘導人皮膚鱗狀細胞癌A431細胞凋亡,并在體內抑制腫瘤的生長。

    2.3抗疲勞活性

    魏芬芬等[36]通過小鼠疲勞模型灌胃LBP發現,小鼠體內MDA含量降低,自由基和脂質過氧化物清除速率加快,從而緩解了小鼠體力疲勞。周秀蓉[37]發現超聲增強亞臨界水萃取USWE法提取的LBP對小鼠血漿中MDA抑制*強,LBP還可降低血乳酸BLA的生成,加快代謝廢物的清除,延緩疲勞。

    2.4防輻射活性

    張磊等[38]發現LBP可以降低輻射損傷小鼠小腸上皮細胞IECsMDA活性,提高SOD的含量,增強抗凋亡蛋白Bcl-2的表達,抑制促凋亡蛋白Bax的表達,說明LBP具有較好的防輻射功效。楊美等[39]建立小鼠放射損傷模型,灌胃LBP后發現,高劑量LBP可以提高骨髓組織中有核細胞和DNA含量,降低腫瘤壞死因子TNF-α含量,說明LBP對小鼠造血系統放射性損傷具有保護作用。關素珍等[40]建立輻射損傷脊髓神經SCN細胞模型,發現經LBP處理后,SCN細胞存活率均得到提高,說明LBP具有一定的防輻射作用。

    2.5免疫調節作用

    張煒等[41]研究發現高、中、低濃度的LBP皆可促進未成熟樹突狀細胞DC2.4吞噬抗原性能,還可抑制脂多糖LPS誘導促進DC2.4成熟,說明LBP具有一定的免疫調節功能。王瑩[42]發現LBP可改善環磷酰胺CTX導致的小鼠免疫器官萎縮,也可改善某些與免疫通路激活有關的菌群的豐度,還可降低某些與結腸炎、結腸癌等相關的潛在的致病菌的含量。陳艷平等[43]發現以分子量為40350 kDaLBP可促進樹突狀細胞(DCs)成熟,進而誘導T細胞產生特異性免疫應答反應。

    2.6護肝作用

    李梅林等[44]建立CCl4肝損傷模型,LBP給藥后發現中、高劑量LBP均可提高大鼠體內血清白蛋白ALB和總蛋白TP水平,降低谷丙轉氨酶ALT、谷草轉氨酶ASTγ-谷氨酰轉肽酶γ-GT的活性,說明LBP具有較好的肝損傷修護作用。魏芬芬等[45]發現小鼠酒精性肝損傷模型給藥LBP后,小鼠醒酒時間縮短,肝臟中MDA水平降低,還原型谷胱甘肽(GSH)、SOD含量升高,說明LBP對酒精性肝損傷具有保護作用,其機制可能是清除體內自由基代謝產物、增強抗氧化水平以及減緩炎癥反應。CHIANG[46]發現LBP可降低CCl4誘導的大鼠肝纖維化體內TNF-α水平,增加肝白細胞介素-10IL-10水平和IL-10 /TNF-α的比值,說明LBP可改善肝臟細胞炎癥和纖維化指標,有良好的護肝作用。

    2.7其他藥理活性

    XIA[47]證明LBP能促進上皮細胞免疫從促炎微環境向*微環境轉變。通過對LBP處理的小鼠糞便DNA16S測序發現,潛在致病菌明顯減少,且LBP處理富集了木聚糖-纖維降解菌和短鏈脂肪SCFAs產生菌,這些結果表明LBP可以增強腸道微環境并調節小鼠腸道菌群。YAO[48]發現LBP阻礙了晶狀體白內障的發展并改善視網膜功能,通過上調Sirt1Bcl-2,抑制細胞死亡相關基因來預防動物糖尿病性白內障。ZHANG[49]發現LBP可促進成骨細胞MC3T3-E1細胞增殖,還可增強細胞核增殖抗原(PCNA)、Ki67等與MC3T3-E1細胞增殖相關的關鍵蛋白的表達,說明LBP對骨病有潛在的*作用。

    3.枸杞多糖的應用

    LBP因其強大的藥理活性而得到廣泛應用。LIU[50]LBP作為穩定劑和封端劑來制備硒納米顆粒SeNPs),發現LBP1-SeNPs可通過增加糖原儲備、增強抗氧化酶水平和調節代謝機制從而緩解疲勞,表明LBP1-SeNPs可作為一種潛在的抗疲勞營養補充劑進行開發。邸多隆等[51]發明了一種以LBP和海地瓜多肽為主要活性成分且具有降血糖功效的藥物,對鏈脲佐菌素引起的型糖尿病大鼠具有保護作用。WANG[52]設計了一種5-氨基水楊酸修飾的LBP與鉑化合物連接的多糖-鉑結合物,用來構建*金屬藥物遞送系統,發現LBP作為藥物載體可以減少副作用,多糖-鉑結合物在體外表現出顯著的抗腫瘤活性。

    LBP添加到畜禽日糧中,可以改善畜禽生長性能。趙倍瑩等[53]在獺兔飼料中添加LBP,發現獺兔肉品質得到提高,營養物質表觀消化率和屠宰性能有所改善。孫甜甜等[54]在肉仔雞日糧中添加枸杞粗多糖,發現可提升肝臟抗氧化水平和抗氧化酶活性,并促進相關基因的表達。

    4.結語

    LBP是枸杞中*主要的活性成分,因其強大的藥理活性而得到廣泛的開發和應用。我國枸杞資源分布廣、品質優,鑒于其藥理作用,可在以LBP為主要活性物質的新藥研發、保健食品和美容產品開發等方面加大研究力度。目前發展LBP產業,仍存在提取率較低、純化方法不完善、結構表征鑒定技術應用不全面等制約因素。為了更好地促進LBP產業發展,應在不破壞LBP藥理作用的同時提高其提取率,采用新的純化和結構鑒定方法,不斷地將更多的精深加工技術應用于產品開發,使LBP研發水平得到提升,從而獲得更大的經濟效益,為推進其產業發展提供新的思路及科學依據。

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    收稿日期:2021-07-12

    基金項目:國家自然科學基金項目(31560323)

    作者簡介:汪明金(1999-),男,土族,本科生。研究方向:植物多糖提取技術。E-mail:1937985886@qq.cpm

    *通訊作者:龍玲(1978-),女,博士,教授。研究方向:天然產物抗腫瘤。E-mail:393934482@qq.com


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